登记号:G2017-344

　　登记年:2017

　　成果名称:近红外荧光标记--纳米免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌相关抗原的实验研究

　　成果类别:应用技术-方法类

　　项目来源:广东出入境检验检疫局

　　专业类别:出入境检疫-出入境卫生检疫

　　起止日期:2013年2月 至2015年7月

　　主要完成单位:广东出入境检验检疫局

　　主要完成人:周艳容

　　适用范围:卫生、社会保障和社会福利

　　成果摘要:"我们选择了ESAT-6和LAM作为研究对象，它们在结核分枝杆菌的抗原研究中具有非常重要的代表性。本研究建立了一种定量检测结核分枝杆菌早期分泌性蛋白（ESAT-6）和脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）的方法，将纳米免疫磁珠偶联与近红外荧光染料标记法结合起来，利用纳米磁珠表面羧基活化后可与抗体表面的氨基共价结合，从而将抗体固定到纳米磁珠表面，有利于抗原抗体反应顺利进行的特点；同时近红外荧光染料可最大限度减少环境中杂散荧光物质的干扰。

　　本课题研究工作包括下列内容：

　　一、制备近红外荧光染料标记的ESAT-6、LAM单克隆抗体；

　　二、制备LAM多克隆抗体；1、制备LAM纯化抗原；2、制备兔抗LAM多克隆抗体；

　　三、制备ESAT-6多克隆抗体和LAM多克隆抗体包被的纳米免疫磁珠；

　　四、建立反应体系：采用双抗体夹心原理，用购买的ESAT-6全片段重组蛋白和自制LAM纯化抗原作为标准物抗原，与近红外荧光标记的单克隆抗体和包被在纳米免疫磁珠表面的多克隆抗体反应，经磁性分离后，行荧光强度测定。

　　五、绘制标准曲线；

　　六、检测方法的特异性评价、回收率评价及批内和批间精密度试验；

　　七、临床样本检测。"